CALIBRADO DE MICROPIPETAS

OBJETIVO

El objetivo de esta práctica es manejar correctamente las micropipetas, ya que es una actividad muy habitual en el laboratorio y debemos aprender correctamente como hacerlo.

FUNDAMENTO

Vamos a utilizar la micropipeta ya que es un instrumento de uso habitual en nuestro laboratorio, debido a que trabajamos con cantidades muy pequeñas y no se pueden producir errores, como por ejemplo, en el cultivo celular. Las micropipetas permiten medir volúmenes muy pequeños, del orden de microlitros. Con ellas se puede seleccionar un volumen dentro de un rango de valores determinado por el modelo de micropipeta.

MATERIAL/REACTIVOS

Micropipetas de distintos volúmenes

Vaso de precipitado

Tubos Eppendorf Gradilla

Agua destilada

Puntas de micropipeta

Papel de filtro

Balanza

calibración de micropipetas

PROCEDIMIENTO

Esta prácticas se divide en dos partes; Medición de ciertos volúmenes: 1000µl, 550µl, 75µl, 20µl y 10µl. Calibrar las micropipetas de 1000µl. Primero debemos desinfectar la superficie de trabajo, colocar el papel de filtro sobre el que vamos a trabajar, a continuación colocamos todo el material que necesitamos ordenadamente con el fin de evitar algún derrame innecesario.

A continuación, seleccionar la micropipeta que vamos a utilizar según el volumen a dispensar, para evitar errores. En las micropipetas de rango variable hay que seleccionar el volumen a medir pero tener especial cuidado de no sobrepasar los volúmenes permitidos. Seleccionar la punta apropiada para la micropipeta, aplicando una presión suficiente para asegurar la hermeticidad.

No usar nunca la pipeta sin la punta. Colocar los tubos Eppendorf en las gradilllas Para usar las micropipetas debemos primero apretar el botón pulsador hasta el primer tope, con la pipeta en posición vertical sumergir la punta 1-3 mm en la muestra y aspirar el líquido lentamente, relajando la posición del dedo sobre el botón pulsador. Debemos tener mucho cuidado porque puede entrar aire en la punta, lo que conduce a error. Esperar un segundo y retirar la punta del líquido.

Para depositar el líquido debemos colocar la punta contra la pared del tubo Eppendorf, apretar el botón pulsador hasta el primer tope, tras hacer esto debemos apretar hasta el segundo tope para vaciar el resto del líquido manteniendo apretado el botón en el segundo tope retirar la pipeta deslizando la punta por la pared del recipiente, soltar el botón y finalmente expulsar la punta con ayuda del botón de expulsión que tienen para ello.

Para calibrar las micropipetas hemos preparado 5 tubos Eppendorf con 1000µl. Primero debemos tarar sobre la balanza un tubo Eppendorf vacío para que a la hora de pesar los otros tubos no cuente con el peso de los tubos, sino de lo que hay en su interior.

Una vez pesados los 5 tubos anotamos su peso para la posterior actividad:

Tubo 1-> Tubo 2-> Tubo 3-> Tubo 4-> Tubo 5->

ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS

Para comprobar la veracidad de los resultados debemos calcular: Precisión o error aleatorio; es decir, el % de desviación media. Exactitud o error sistemático; es decir, la desviación estándar.

MEDIDAS DE SEGURIDAD

Usar equipo de protección individual; utilizar bata (remangar las mangas), utilizar guantes y gafas en este caso no es necesario. Tener mucho cuidado con no colocar nunca la micropipeta boca abajo y prestar atención con las puntas de micropipeta.

GESTIÓN DE RESIDUOS

En este caso las puntas de micropipeta se depositan en un vaso de precipitado, Las condiciones ambientales deben estar controladas, las técnicas de pipeteo del operario deben ser las correctas, los cálculos de incertidumbre deben estar probados, los instrumentos con los que se hacen las pruebas (tales como balanzas) calibrados, entre otras cosas; y por eso es sumamente importante que el usuario no ajuste su pipeta por su cuenta, y mande siempre sus instrumentos a laboratorios acreditados.

	Pesada de los ependeorf		Distintas pesadas
	micropipeteo		micropipeteo
	Material y cuaderno de trabajo		Resultados
	material		resultados
	alicuotado
	Enrasado y comparacion de volumenes

CONCLUSION.

La utiizacion de las micropipetas es basico y fundamental para el laboratorio, de ello depende la calidad de los resultados, tambien es fundamental, que el material sea el adecuado y que este en optimas condiciones, asi como unn buen aprendizaje de la tecnica y el seguimiento del protocolo.